Práctica virtual 1. Técnica de siembra en estría en placa.

Universidad Veracruzana
EXPERIENCIA EDUCATIVA:
Microbiología de los Alimentos
NOMBRE DE LOS INTEGRANTES: 
Guerra Segura Eulises Elim
Navarro Arano Jesús Alberto
Solana Bringas Alejandra
Uscanga Ruiz Rominyk Alessandra
Vásquez Hernández Cinthia
NOMBRE DEL ACADÉMICO: 
León Gutiérrez Dinora Marina
PERIODO ESCOLAR:
Febrero-Junio 2022
NOMBRE DE PRÁCTICA: 
Práctica virtual 1. Técnica de siembra en estría en placa.

Objetivo

Que el equipo aprenda diferentes técnicas de siembra y el aislamiento de cultivo de bacterias y levaduras en medios solidos y practique la técnica de siembra por estría en laboratorio virtual.

Marco teórico

Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico. El tamaño, forma, textura o color de una colonia es propio de cada organismo. La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.

Fundamento teórico

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros. En la naturaleza, los microorganismos generalmente se encuentran en poblaciones, formando parte de comunidades de gran complejidad, por lo que uno de los objetivos de estudio más importantes en microbiología es aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante la técnica de estría cruzada para producir colonias aisladas en cultivos sólidos y así, obtener un cultivo puro o axénico, también conocido como cepa, que contiene un solo tipo de microorganismo con la misma composición genética.

Cuando la técnica por estría se aplica para aislar un microorganismo de interés a partir de mezclas donde se encuentra en pequeñas cantidades, generalmente se obtendrán las bacterias dominantes.  En este caso, se utilizan medios selectivos o de enriquecimiento, los que contienen nutrientes especiales, antibióticos, altas concentraciones de sales y/o condiciones de pH, luz o temperatura que incrementarán la población del microorganismo de interés y se facilitará su aislamiento.

Materiales (los usados en laboratorio virtual)

Por equipo

·         4 cajas Petri con agar papa dextrosa (PDA)

·         4 tubos inclinados con PDA 

·         2 mecheros Fischer

·         2 asas de inoculación

·         1 piseta con agua destilada

·         1 incubadora a 30°C

·         1 refrigerador

·         2 pares de guantes de asbesto

·         escobillones, fibra, detergente y toallas de papel papel estraza, algodón y gasa

·         autoclave con base, canastilla y válvula

·         balanzas analíticas

    Metodología 

R Resultados y observaciones

Morfología observada del cultivo:

Color: Amarillo con un subtono café

Opacidad: Opacos

Forma: circulo

Elevación: Plano

Margen: Completo

 

 

Morfología observada del cultivo:

Elevación: plana

Borde: entero

Forma: circular

Margen: entero

Color: amarillo con subtono café

Morfología observada del cultivo:

Color: verde amarillento         

Opacidad: opaca       

Forma: circular 

Borde: entero        

Elevación: plana

Morfología observada en el cultivo:

Color: verde amarillento

Borde: entero 

Forma: circular 

Elevación: plana

Morfología observada en el cultivo:

Color: amarillo con tono cafecito y toque de verde

Opacidad: opaca

Forma: circular

Borde: entero

Elevación: plana

Conclusión

Con la realización de esta práctica cada uno de los integrantes de este equipo logramos obtener de manera satisfactoria el aprendizaje necesario de la técnica de siembra por estría ya que, a pesar de haber complicaciones para llegar al objetivo obtuvimos cada uno bastantes colonias bien definidas. De igual forma, nos ayudó muchísimo el aprendizaje obtenido previamente acerca del proceso de cultivo y las diferentes maneras de llevarse a cabo.

Cuestionario:

1. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la técnica de estría cruzada virtual vs real?
VENTAJAS DE LA VIRTUAL: más facilidad de hacer las cosas, no se ocupa material como tal, se puede repetir las veces que uno quiera, no se debe esperar las 24 horas indicadas, el mismo simulador nos va guiando, no hay margen de error.

Desventajas: no se aprende se igual manera, no se puede observar fácilmente las características macroscópicas, no se observa el proceso real del cómo se prepara el medio de cultivo en la casa Petri y de cómo se realiza la primera inoculación.

VENTAJAS DE LA REAL: Se lleva a cabo todo el proceso de realizar la preparación del medio y de cómo se lleva a cabo el primer cultivo, se pueden observar sus características macroscópicas, se puede dar un resultado más claro y también se comprende de mejor manera.

Desventajas: hay más margen de error, se ocupa todo un material de laboratorio, solo se puede realizar una sola vez, y se debe esperar todo un día completo para que se observen los resultados.

2.    2. ¿Qué tipo de tinciones se puede realizar para identificar la morfología del modo?

Tinción Azul de Lactofenol o azul algodón

La tinción de Azul de lactofenol se emplea para observar hongos.

Es una tinción simple (un sólo colorante) y como tal está basada en la afinidad del colorante por componentes de las células, en este caso por las estructuras fúngicas.

El azul de lactofenol tiene tres características que lo hacen especial para observar dichas estructuras en los hongos del tipo moho obtenidos en los cultivos por aislamiento.

• El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los cultivos, juntos a los hongos pueden crecer colonias de bacterias)
• El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por decirlo de algún modo, una película que las protege provocado por un cambio de gradiente osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.
• El azul de algodón tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios de los hongos microscópicos

Tinción Con Naranja De Acridina

• Transferir una gota del cultivo a un portaobjetos limpio y desengrasado, dejar secar al aire.

• Fijar con etanol al 100%, cubriendo el frotis durante 5 min.

• Eliminar el etanol y colocar 100 ml de naranja de acridina durante 3min.

Eliminar el exceso del colorante con etanol al 70%.

• Observar en un microscopio de EPI fluorescencia con un filtro azul, emisión a 490 nm.

Tinción Diferencial

 

Tinción De Ziehl-Neelsen (Aar)

• Se utiliza para diferenciar las bacterias denominadas ácido alcohol resistente del No ácido alcohol resistente

• Algunas bacterias poseen, en su pared celular, ciertos ácidos grasos de cadena larga que les confiere la propiedad de resistir la decoloración con alcohol ácido, tras haber sido teñidas con colorantes básicos.

• Esta tinción requiere un calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene la capa cerosa formada por ácido micólico. 

3.   3. Investigue la composición química del medio AN Y PDA.

COMPOSICION DEL MEDIO AN

Es un polisacárido de galactosa y galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina. El agaragar es el agente solidificante más utilizado. Su composición química es indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fría, pero se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45 oC. Forma geles transparentes muy estables y es degradado por muy pocas bacterias.

COMPOSICION DEL MEDIO PDA

El AGAR DE DEXTROSA DE PAPA se utiliza para el aislamiento, enumeración y cultivo de levaduras y mohos a partir de muestras. También se puede utilizar en la identificación de hongos y levaduras en paralelo con su morfología celular o en métodos de micro cultivo en portaobjetos.

Agar Papa Dextrosa Agar (PDA). Este medio preparado en el laboratorio se compone de 250 g de trozos de papa con cascaras, 20 g de dextrosa y 20 g de agar agar, todo esto para 1 1 de agua destilada.

• Extracto de patata          4,0 g
• Dextrosa                      20,0 g
• Agar‑agar                    15,0 g

 

 

REFERENCIAS

EQUIPO 3 - 3°G. (2015). Tipos y medios de cultivo. 2 DE DICIEMBRE, de CBTIS 128 Sitio web: https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/blank-nzn6g 

-. (-). CONCEPTO DE MEDIO DE CULTIVO. -, de - Sitio web: https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-i/pb-i-2-concepto.htm#:~:text=El%20agar%2Dagar%20es%20un,el%20agente%20solidificante%20m%C3%A1s%20utilizado.

-. (2017). POTATO DEXTROSE AGAR (PDA). 5 DE ENERO, de Microkit: Medios de Cultivo Sitio web: https://www.medioscultivo.com/potato-dextrose-agar-pda/ 

Enlace de Blog 

https://tecnicasdesiembraymorfologiacolonial.blogspot.com/2022/03/tecnicas-de-siembra-y-morfologia.html